活性蛋白提取方法

时间：2023-05-01 06:32:13 资料我要投稿

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活性蛋白提取方法

活性蛋白提取试剂盒

产品组成：

产品组成规格活性蛋白提取液蛋白酶抑制剂混合物

使用说明书

BB-3106-1

50T 25ml 100ul 1

BB-3106-2 100T 50ml 200ul 1

储存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液室温保存。

有效期：

一年。

产品简介：

贝博活性蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活测定等下游蛋白研究。

使用方法：

细胞蛋白提取：

1. 提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul

磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

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2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养

基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20

分钟。

5. 在4℃，14000rpm条件下离心15分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

②③

7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取：

1. 提取液制备：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul

磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取100mg组织样本剪碎，加入蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼

可见固体。

3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。 4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白样品。

5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

参考文献：

● Pin Huan, Hongxia Wang et al. Identification of differentially expressed proteins involved

in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）

● Chao Wang, Xin Yue et al.

Shrimp MyD88 responsive to bacteria and white spot syndrome virus Fish & Shellfish Immunology 2012 （IF=3.322）

● Liu Tao, Chen Suhua et al. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early pregnancy villous EVT's invasion function

Virology Journal 2011, 8:114 （IF=2.55）

● Xin Yue et al. Cloning and characterization of a hsp70 gene from Asiatic hard clam Meretrix meretrix which is involved in the immune response against bacterial infection

Fish & Shellfish Immunology 2011 Volume 30, Issue 3, Pages 791-799 （IF=3.322）

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