核-胞浆蛋白提取方法

时间：2021-11-05 19:37:08 资料我要投稿

核-胞浆蛋白提取方法

核蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒

产品组成：

产品组成规格提取液A 提取液B 蛋白酶抑制剂混合物

说明书

BB-3112-1

50T 10ml 10ml 250ul 1

BB-3112-2 100T 20ml 20ml 500ul 1

储存条件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期：

一年。

产品简介：

贝博核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供配套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

应用示例：

1 2 3

图片说明：用核蛋白提取试剂盒提取大肠组织样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳道中1、2、3分别为Marker、胞浆蛋白、核蛋白样本。图2为以上样品的GAPDH内参的WB结果照片。

使用方法：

细胞蛋白提取

1. 提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别各加入2ul蛋白酶抑制剂

混合物，混匀后置冰上备用。

①

2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，

尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每5-10×106中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置

冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。

5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80

℃冰箱保存备用。

7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟，弃上清。

②

8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。

11. 快速将上清吸入另一预冷的'干净离心管，即可得到核蛋白。

③④

12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取

1. 提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别各加入2ul蛋白酶抑制剂

混合物，混匀后置冰上备用。

①

2. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或

用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。 3. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。

4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，

置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。

5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80

℃冰箱保存备用。

7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟，弃上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。

11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

②③

12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

参考文献：

● Guang Yu, Tonghai Yan, Ye Feng et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease

Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

● Xiaohui Yan,Tianjiao Lyu,Nan Jia et al. Huaier Aqueous Extract Inhibits Ovarian Cancer Cell Motility via the AKT/GSK3β/β-Catenin Pathway PLoS ONE 2013 （IF=4.092）

● Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al. Ophiopogonin D prevents

H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells

Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, （IF=3.014）