用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化

用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化

目的 用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶(α-Chy)及其折叠中间体的分子构象变化.方法 用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离,对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(HPHIC-MALDI-TOF-MS)进行检测,并用紫外和荧光光谱对其分子构象变化进行了验证.结果 确认了脲变α-Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在,发现二者的Z值均随脲浓度的增加而减小.在脲浓度范围为0～3.0 mol·L-1时,α-Chy折叠中间体的Z值远小于天然α-Chy的Z值,而脲浓度为4.0 mol·L-1和5.0 mol·L-1时,折叠中间体的Z值稍大于天然α-Chy的Z值.结论 α-Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化,而天然α-Chy的分子构象随脲浓度呈不连续性变化.进一步发现α-Chy的Z值与其复性回收率之间存在着相似的变化规律.中间体的保留机理服从计量置换保留理论(SDT-R),且得到的参数Z可用来表征天然α-Chy和其折叠中间体的分子构象变化.

作 者： 耿信笃 刘振岭 柯从玉 李建军 GENG Xin-du LIU Zhen-ling KE Cong-yu LI Jian-jun   作者单位： 耿信笃,柯从玉,李建军,GENG Xin-du,KE Cong-yu,LI Jian-jun(西北大学,现代分离科学研究所/合成与天然功能分子化学教育部重点实验室,陕西,西安,710069)

刘振岭,LIU Zhen-ling(西北大学,现代分离科学研究所/合成与天然功能分子化学教育部重点实验室,陕西,西安,710069;新乡医学院,化学教研室,河南,新乡,453003) 

刊 名： 西北大学学报(自然科学版)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2007 37(6)  分类号： O658  关键词： 蛋白折叠   分子构象   疏水相互作用色谱   基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)   计量置换   α-糜蛋白酶(α-Chy)   折叠中间体  

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