圆二色谱研究Asp44在稳定肌红蛋白结构中的作用

圆二色谱研究Asp44在稳定肌红蛋白结构中的作用

摘要：为了了解肌红蛋白Mb分子表面44位天冬氨酸对稳定肌红蛋白结构的影响,用PCR定点突变的技术将肌红蛋白(Mb)基因上的第44位天冬氨酸的密码子GAT突变成赖氨酸的密码子AAA,获得突变体D44K基因,将突变体基因克隆在肌红蛋白表达质粒pGYM上,转化大肠杆菌BL21,突变蛋白D44K在大肠杆菌中大量表达,收集菌体.酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀、离子交换柱层析、凝胶柱层析分离纯化得突变肌红蛋白D44K.用圆二色谱分别研究野生型肌红蛋白及其突变体(D44K)的耐热及耐酸的变性过程.实验结果表明:用碱性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44残基,增强了肌红蛋白耐热变性能力,导致蛋白质的热变性中点温度Tm由71.9 ℃增加到75.1 ℃,但对肌红蛋白耐酸变性的能力影响不大. 作者： 王静云[1]刘丹[1]唐乾[2]包永明[1]郑学仿[3]安利佳[1] Author： WANG Jing-yun[1]  LIU Dan[1]  TANG Qian[2]  BAO Yong-ming[1]  ZHENG Xue-fang[3]  AN Li-Jia[1] 作者单位： 大连理工大学环境生命学院,辽宁,大连,116024大连理工大学环境生命学院,辽宁,大连,116024;辽宁省高校生物有机重点实验室,大连大学,辽宁,大连,116622辽宁省高校生物有机重点实验室,大连大学,辽宁,大连,116622 期 刊： 光谱学与光谱分析   ISTICEISCIPKU Journal： SPECTROSCOPY AND SPECTRAL ANALYSIS 年，卷(期)： 2008, 28(2) 分类号： Q518.4 关键词： 肌红蛋白    定点突变    圆二色谱    蛋白质结构    结构稳定性    机标分类号： TS2 R73 机标关键词： 色谱研究    蛋白结构    肌红蛋白    突变体    天冬氨酸    转化大肠杆菌    离子交换柱层析    热变性    密码子    基因克隆    酸性氨基酸    凝胶柱层析    硫酸铵沉淀    碱性氨基酸    圆二色谱    突变蛋白    能力影响    耐酸    耐热    酶法裂解 基金项目： 国家自然科学基金，教育部留学回国人员科研启动基金

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