大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达

目的 构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白.方法 以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coli DH5a,经温控诱导表达,并经Ni2+ -NTA亲和层析纯化,目的 蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组质粒pBV220-PGDH-Hia6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确.经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%.Western blot验证了表达蛋白的特异性.纯化后目的 蛋白纯度大于95%.结论 已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白.

作 者： 李美宁 冯燕 常冰梅 解军 张悦红 殷云勤 程牛亮   作者单位： 李美宁,冯燕,常冰梅,解军,张悦红,程牛亮(山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,太原,030001)

殷云勤(山西医科大学第一医院消化检验中心,太原,030001) 

刊 名： 中国生物制品学杂志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(4)  分类号： Q78  关键词： 大肠癌   15-羟基前列腺素脱氢酶   克隆   原核表达  

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