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重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达
目的:构建重组人PCNA突变体(mutant PCNA,mPCNA)的真核表达质粒,并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela.为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础.方法:将舍有定点突变的PCNA cDNA序列克隆到T载体中,然后再亚克隆到真核表达栽体pCDNA3.1/V5-His A上,构建真核表达载体质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,稳定转染到Hela细胞中;Western Blotting法检测蛋白的表达情况;白细胞记数法测定细胞的生长速率.结果:真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA经酶切、测序分析与实验设计的序列完全一致;稳定建系后,Western Blotting结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;稳定高表达mPCNA的细胞系与野生型细胞相比两者的生长速率基本一致.结论:成功构建了真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA;建立了稳定高表达该突变体的Hela细胞系;PCNA突变体的高表达不影响Hela细胞的正常生长.
作 者： 位全芳 杨劲 曾益军 周虎传 李劲 刘洋 李杰 WEI Quan-fang YANG Jin ZENG Yi-jun ZHOU Hu-chuan LI Jin LIU Yang LI Jie 作者单位： 位全芳,杨劲,曾益军,周虎传,WEI Quan-fang,YANG Jin,ZENG Yi-jun,ZHOU Hu-chuan(第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室,重庆,400038)李劲,刘洋,李杰,LI Jin,LIU Yang,LI Jie(第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所,重庆,400038)
刊 名： 现代生物医学进展 ISTIC 英文刊名： PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)： 2008 8(4) 分类号： Q78 Q813 关键词： 增殖细胞核抗原 突变体 稳定转染 Hela细胞【重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达】相关文章：
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