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丙型肝炎病毒NS5B全长基因及截短形式基因的克隆、表达及鉴定
目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-FL、NS5B-C21和NS5B-C51重组原核表达载体,并进行目的蛋白的表达及鉴定.方法 利用PCR技术扩增3种长度的NS5B基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,并进行纯化及鉴定.结果 所构建的3种重组质粒pET-28a(+)-NS5B-FL、pET-28a(+)-NS5B-C21和pET-28a(+)-NS5B-C51,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经PCR及酶切鉴定,均能扩增或酶切出相应大小的目的基因片段,表达的6His-NS5B-FL融合蛋白主要以包涵体形式存在,而表达的6His-NS5B-C21和6His-NS5B-C51融合蛋白的可溶性明显增加.纯化的6His-NS5B-C21蛋白未发生降解,6His-NS5B-FL和6His-NS5B-C51蛋白发生了部分降解.纯化后的3种蛋白均能与丙肝患者血清发生反应.结论 已成功构建了3种NS5B基因的重组表达载体,并获得了目的蛋白表达,为进一步抗HCV药物的筛选奠定基础.
作 者： 杨华凤 潘明洁 吕敏 李越希 作者单位： 杨华凤,吕敏(南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系,南京,210029)潘明洁,李越希(南京军区军事医学研究所,南京,210002)
刊 名： 中国生物制品学杂志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS 年，卷(期)： 2008 21(1) 分类号： Q786 关键词： 丙型肝炎病毒 非结构区5B蛋白 克隆 表达【丙型肝炎病毒NS5B全长基因及截短形式基因的克隆、表达及鉴定】相关文章：
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