基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体的构建

基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体的构建

目的:制备基于Xcm Ⅰ酶切的高效TA克隆载体,并检测其克隆PCR产物的效果.方法:设计一对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点,从而在该多克隆位点中引入2个Xcm Ⅰ酶切位点,用Xcm Ⅰ酶切后即获得含有3'突出T碱基的T载体;为了提高该T载体的克隆效率,优化了2个Xcm Ⅰ酶切位点之间的碱基数目,排除了载体自连产生白色克隆的可能性,使假阳性大大减少;此外,为了便于完全酶切与未完全酶切载体的分离,在2个Xcm Ⅰ之间插入了一段无关DNA片段.结果:改进得到的T载体可以有效克隆PCR产物,其阳性克隆率可达95%.结论:构建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆载体,经过改进的T载体具有很高的克隆效率.

作 者： 顾頠 张昕 安小平 陈锦辉 刘大斌 张宝中 周育森 童贻刚 GU Wei ZHANG Xin AN Xiao-Ping CHEN Jin-Hui LIU Da-Bin ZHANG Bao-Zhong ZHOU Yu-Sen TONG Yi-Gang   作者单位： 顾頠,GU Wei(军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;济南军区联勤部,疾病预防控制中心,山东,济南,250014)

张昕,安小平,陈锦辉,刘大斌,张宝中,周育森,童贻刚,ZHANG Xin,AN Xiao-Ping,CHEN Jin-Hui,LIU Da-Bin,ZHANG Bao-Zhong,ZHOU Yu-Sen,TONG Yi-Gang(军事医学科学院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分类号： Q78  关键词： T载体   限制性内切酶XcmⅠ   聚合酶链反应  

【基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体的构建】相关文章：

构建高效课堂实施方案04-28

构建高效课堂心得体会03-23

构建高效课堂心得体会02-22

构建高效课堂讲座心得（通用10篇）11-12

构建高效课堂心得体会15篇03-01

构建高效课堂心得体会(15篇)03-27

构建高效课堂心得体会13篇05-13

Ta，不普通05-04

基于大数据技术的班级管理平台构建论文范文12-14

构建高效课堂心得体会通用15篇04-26