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采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体
目的:采用基于attLXattR的λ噬菌体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒栽体(Ad-hBMP-2).方法:从pcDNA3.1质粒中获取目的基因hBMP-2片段,连入带attL1、attL2位点的入门载体pENTRTM11中.形成入门克隆,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST在高效重组酶作用下发生体外重组形成表达克隆ad-BMP-2,经鉴定将ad-BMP-2线性化后转入293A细胞包装,通过细胞裂解法获得人骨形态发生蛋白-2的基因重组腺病毒珠Ad-hBMP-2,将其扩增,采用western blotting技术分析目的蛋白表达.结果:经酶切及测序证实目的基因BMP-2片段按正确方向重组入目的载体中,带BMP-2的目的栽体在293A细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,测得病毒滴度为2.5×109pfu/ml.western blotting结果证实Ad-hBMP-2在293A细胞中高效表达hBMP-2蛋白.结论:本实验首次利用基于λ噬菌体的住点特异性重组系统的GatewayTM技术成功构建了Ad-hBMP-2,该技术与传统构建方法比较具有高效性和灵活性,为进一步研究BMP-2的生理功能和利用BMP-2进行骨基因治疗奠定了实验基础.
作 者： 蒋红梅 龙洁 汤炜 田卫东 刘磊 林云锋 王杭 李鹏 JIANG Hong-mei LONG Jie TANG Wei TIAN Wei-dong LIU lei LIN Yun-feng WANG Hang LI Peng 作者单位： 四川大学华西口腔医学院,成都,610041 刊 名： 现代生物医学进展 ISTIC 英文刊名： PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)： 2008 8(2) 分类号： Q78 关键词： 骨形态发生蛋白-2 GatewayTM技术 重组腺病毒【采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体】相关文章：
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