绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析

绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析

利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256).经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在.将包涵体蛋白用8 mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白.由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象.采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右.为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0.4 mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测.结果表明:通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172.80 u左右.经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为:α螺旋为39.4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60.6%.绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据.

作 者： 刘美丽 赵德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min   作者单位： 中国农业大学,国家动物海绵状脑病实验室,北京,100094  刊 名： 中国预防兽医学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE  年，卷(期)： 2006 28(6)  分类号： Q78  关键词： 绵羊朊病毒蛋白   原核表达   圆二色谱   结构分析  

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