TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究

TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究

目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表达载体,并进行表达条件优化和初步纯化.方法 设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.将鉴定(酶切及序列分析)阳性的重组子质粒转入大肠埃希菌ER2566表达菌中, 采用蛋白质SDS-PAGE 电泳方法 分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况.结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃诱导过夜(14～16 h),目的蛋白获得较高表达量,且大部分为可溶性蛋白.结论 采用大肠埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达,经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白.

作 者： 杨文理 陈守春 陈毅荣 覃扬 YANG Wen-li CHEN Shou-chun CHEN Yi-rong QIN Yang   作者单位： 杨文理,覃扬,YANG Wen-li,QIN Yang(四川大学华西基础医学与法医学院,生物化学与分子生物学教研室,成都,610041)

陈守春,陈毅荣,CHEN Shou-chun,CHEN Yi-rong(地奥集团新药研究所) 

刊 名： 四川大学学报（医学版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 37(5)  分类号： Q5  关键词： 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体   蛋白内含子   原核表达  

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