抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定

抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定

目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体.方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因.测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表达.目的蛋白通过Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化、复性.用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013 cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体.结果:得到约1.9 kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体.结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体.

作 者： 赵莉霞 颜冰 朱恒奇 许龙 黄培堂 ZHAO Li-xia YAN Bing ZHU Heng-qi XU Long HUANG Pei-tang   作者单位： 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分类号： Q813.2  关键词： 人转铁蛋白受体   噬菌体抗体库   筛选   单链抗体  

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