GST-GnRH/TRS融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

GST-GnRH/TRS融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

以人工合成的促性腺激素释放激素(Gonadotropin releasing hormone,GnRH)/转运肽(TRS)基因与表达载体pGEX-6p-1相连的重组子(pGE-G)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(ED3)plyS.本文对GST-GnRH/TRS/ BL21(DE3) plyS工程菌的GST-GnRH/TRS重组产物进行了诱导表达和分离纯化的研究,结果表明,该工程菌用LB培养基在30℃扩增至OD590为0.6左右,加IPTG(终浓度为0.2 mmol/L)诱导3.5 h,此时GST-GnRH/TRS的表达量可占菌体总蛋白的33.3%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经溶菌酶破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再用8 mL 1%(V/V)Triton X-100变性溶解IBs,离心取上清,进行Glutathione Sepharose 4B柱一步法亲和层析,得到了纯度较高的GST-GnRH/TRS融合蛋白,为进一步研究和实际应用奠定基础.

作 者： 金元昌 陈春岚 苏晓艳 李会东 令玉林 李景鹏 JIN Yuan-chang CHEN Chun-lan SU Xiao-yan LI Hui-dong Ling Yu-Lin LI Jing-peng   作者单位： 金元昌,李会东,JIN Yuan-chang,LI Hui-dong(湖南科技大学生命科学学院,湖南湘潭,411201)

陈春岚,CHEN Chun-lan(贺州学院,广西贺州,542800)

苏晓艳,SU Xiao-yan(湖西科技大学附属医院,湖南湘潭,411201)

令玉林,Ling Yu-Lin(湖南科技大学化学化工学院,湖南湘潭,411201)

李景鹏,LI Jing-peng(东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨,150030) 

刊 名： 西北农业学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA  年，卷(期)： 2006 15(4)  分类号： Q785 S852.21  关键词： GnRH   融合蛋白   分离纯化与复性  

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