人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.

作 者： 姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang   作者单位： 姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)

李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港) 

刊 名： 细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分类号： Q786  关键词： CIDE-3   基因克隆   原核表达  

【人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达】相关文章：

IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核与植物表达载体的构建04-26

麻疯树毒蛋白curcin2基因的两个原核表达载体的构建和表达04-26

RS基因的植物表达载体和酵母表达载体构建04-27

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达04-26

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达04-27

大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定04-26

大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达04-27

细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达04-27

STAT6分子不同功能域原核表达载体的构建04-26

人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定04-26