林麝IL-2细胞因子的克隆、表达和纯化

林麝IL-2细胞因子的克隆、表达和纯化

用林麝( Moschus berezovskii)外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)提取总RNA,RT-PCR扩增IL-2(interleukin-2, IL-2),连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序.然后将IL-2成熟肽编码序列连接到pGEX4T-1原核表达载体进行表达、纯化.结果表明林麝IL-2开放阅读框全长468 bp,编码155个氨基酸.序列分析表明,林麝IL-2及其受体结合域与水牛的高度保守,而在翻译后修饰的预测活性位点上和水牛的有所不同.IPTG诱导林麝IL-2蛋白表达,得到约41 kD的目标带;优化表达后,林麝IL-2表达含量达到了总蛋白量的25%.经GST亲和柱分离纯化,得到了约41 kD的单一目标带,这说明林麝IL-2基因的原核表达成功.

作 者： 赖彬 徐柳 岳碧松 邹方东 LAI Bin XU Liu YUE Bi-song ZOU Fang-dong   作者单位： 赖彬,岳碧松,邹方东,LAI Bin,YUE Bi-song,ZOU Fang-dong(生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川大学生命科学院,成都,610064)

徐柳,XU Liu(生物资源与生态环境教育部重点实验室,四川大学生命科学院,成都,610064;西南交通大学生物工程学院) 

刊 名： 四川动物  ISTIC PKU 英文刊名： SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY  年，卷(期)： 2006 25(4)  分类号： Q95  关键词： 林麝白介素-2   克隆   原核表达  

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