意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达

意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达

利用Bac to Bac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2.SDS-PAGE电泳结果显示,与6×His Tag融合表达的产物蛋白分子量约为18 kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5.35%.Western blot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应.生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6.13 μmol·min-1·mg-1.

作 者： 沈立荣 邢丽苹 张传溪 程家安 SHEN Li-Rong XING Li-Ping ZHANG Chuan-Xi CHENG Jia-An   作者单位： 沈立荣,SHEN Li-Rong(浙江大学生物系统工程与食品科学学院)

邢丽苹,张传溪,程家安,XING Li-Ping,ZHANG Chuan-Xi,CHENG Jia-An(浙江大学应用昆虫学研究所,杭州,310029) 

刊 名： 昆虫学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ENTOMOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 49(3)  分类号： Q966  关键词： 意大利蜜蜂   蜂毒   磷脂酶A2基因   杆状病毒-昆虫细胞系统   表达  

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