人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备

时间:2023-04-27 21:57:25 生物医学论文 我要投稿
  • 相关推荐

人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备

目的 确定人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法,利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO-1多克隆抗体.方法 将hHO-1原核表达质粒pMW172/hHO-1转入大肠埃希菌菌株BL21,通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件;利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白,建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性;利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性,通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性.结果 确定hHO-1最佳可溶性表达条件为:37 ℃、200 r/min培养3 h后,0.1 mmol/L IPTG诱导培养4 h.超声破碎菌体,上清经30%~40%盐析纯化及分子筛层析纯化,获得活性hHO-1蛋白,收得率为30.3%,纯化倍数为2.83倍,纯度为90 %.制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10~6,并能中和掉46 % hHO-1的催化活性.结论 为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案;获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体,为HO-1功能、结构研究,以及相关疾病研究奠定了基础.

作 者: 魏旭冉 杨军 刘庆军 王波 周虹 WEI Xuran YANG Jun LIU Qingjun WANG Bo ZHOU Hong   作者单位: 军事医学科学院野战输血研究所,北京市,100850  刊 名: 医学分子生物学杂志  ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年,卷(期): 2010 7(2)  分类号: Q55  关键词: 血红素加氧酶   原核表达   可溶性表达   纯化   中和抗体   heme oxygenase-1   prokaryotic expression   soluble expression   purification   neutralization antibody  

【人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备】相关文章:

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化04-27

酸弗林蛋白酶酸性氨基酸簇分选蛋白-1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备04-27

人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备04-26

人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定04-26

青稞中β-1,3-葡聚糖酶的纯化及其抗血清的制备04-26

帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备04-26

人基质蛋白酶2(MMP-2)类血红素结构域原核表达优化04-26

GST-hDSL重组蛋白的原核表达纯化及对人造血祖细胞的扩增作用04-26

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达04-27

抗体分离纯化技术的研究进展04-27