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人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备
目的 确定人血红素加氧酶-1(human heme oxygenase-1,hHO-1)在大肠埃希菌中的表达条件与纯化方法,利用纯化的蛋白制备具有中和活性的hHO-1多克隆抗体.方法 将hHO-1原核表达质粒pMW172/hHO-1转入大肠埃希菌菌株BL21,通过改变摇床转速、诱导剂IPTG浓度和培养时间确定hHO-1蛋白的最佳可溶性表达条件;利用超声破碎、高速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化hHO-1蛋白,建立体外HO-1活性测定方法检测hHO-1蛋白的活性;利用纯化的hHO-1活性蛋白作为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;利用ELISA方法和Western印迹技术分别测定抗体的效价和特异性,通过HO-1活性测定检测抗体的中和活性.结果 确定hHO-1最佳可溶性表达条件为:37 ℃、200 r/min培养3 h后,0.1 mmol/L IPTG诱导培养4 h.超声破碎菌体,上清经30%~40%盐析纯化及分子筛层析纯化,获得活性hHO-1蛋白,收得率为30.3%,纯化倍数为2.83倍,纯度为90 %.制备的抗hHO-1的兔血清效价达到10~6,并能中和掉46 % hHO-1的催化活性.结论 为hHO-1蛋白的表达和纯化以及多克隆抗体制备确立了可行的技术方案;获得了高纯度活性hHO-1蛋白及hHO-1多克隆抗体,为HO-1功能、结构研究,以及相关疾病研究奠定了基础.
作 者: 魏旭冉 杨军 刘庆军 王波 周虹 WEI Xuran YANG Jun LIU Qingjun WANG Bo ZHOU Hong 作者单位: 军事医学科学院野战输血研究所,北京市,100850 刊 名: 医学分子生物学杂志 ISTIC 英文刊名: JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年,卷(期): 2010 7(2) 分类号: Q55 关键词: 血红素加氧酶 原核表达 可溶性表达 纯化 中和抗体 heme oxygenase-1 prokaryotic expression soluble expression purification neutralization antibody【人血红素加氧酶-1的原核表达、纯化及其中和抗体的制备】相关文章:
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