雅致枝霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

雅致枝霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

根据真菌△6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806△6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的△6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列.序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6.推测的氨基酸序列与已知其他真菌的△6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区.将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSc1中异源表达.通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%.证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的△6-脂肪酸脱氢酶基因(GenBank,AY941161).

作 者： 王德培 李明春 魏东盛 张颖慧 邢来君 孙伟 WANG De-pei LI Ming-chun WEI Dong-sheng ZHANG Ying-hui XING Lai-jun SUN Wei   作者单位： 南开大学微生物系,天津市微生物功能基因组学重点实验室,天津,300071  刊 名： 微生物学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(1)  分类号： Q78  关键词： 雅致枝霉   △6-脂肪酸脱氢酶基因   γ-亚麻酸   酿酒酵母   表达  

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