人源血管内皮生长因子突变体的克隆、分离纯化及活性研究

人源血管内皮生长因子突变体的克隆、分离纯化及活性研究

目的:为获得大量人源血管内皮生长因子突变体(hVEGF121′)的重组蛋白,本文研究了其发酵条件,分离纯化方法,并初步考察了其生物活性.方法:应用PCR介导的定点突变方法,将hVEGF121中对其活性影响较小的1～8位和115～121位两个肽段替换成破伤风毒素(TT)的两个强表位肽段618～627位和831～837位,构建高效表达的pET28a/hVEGF121′重组质粒,考察诱导条件对目的蛋白表达量的影响;所得包含体经过DEAE-Cellulose离子交换柱纯化;初步比较了VEGF121和突变体VEGF121′的免疫和抗肿瘤效果.结果:最佳表达条件为:乳糖诱导时间6 h,诱导浓度2 mmol/L;离子交换纯化后可得到电泳纯的突变体hVEGF121′;初步的动物免疫发现突变体VEGF121′和VEGF121有相近的免疫滴度,但前者抗肿瘤效果更显著.结论:经发酵纯化后得到重组人源血管内皮生长因子突变体(hVEGF121′)的纯品,并初步展现良好的抗肿瘤效果.

作 者： 周红霞 周梅仙 吴洁 胡卓逸 刘景晶 ZHOU Hong-xia ZHOU Mei-xian WU Jie Hu Zhuo-yi LIU Jing-jing   作者单位： 周红霞,ZHOU Hong-xia(中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009;南京晓庄学院生命科学系,南京,210017)

周梅仙,ZHOU Mei-xian(南京晓庄学院生命科学系,南京,210017)

吴洁,胡卓逸,刘景晶,WU Jie,Hu Zhuo-yi,LIU Jing-jing(中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009) 

刊 名： 中国药科大学学报  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 37(3)  分类号： Q78  关键词： 血管内皮生长因子   突变体   纯化   免疫原性   抗肿瘤  

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