果树三倍体育种研究的论文
摘要：本文综述了果树三倍体的研究进展：果树三倍体育种的途径主要包括利用对自然变异的选择获得三倍体、利用有性杂交来培育三倍体、利用胚乳培养获得三倍体和利用原生质融合培育三倍体；对三倍体的鉴定主要从形态特征、解剖结构、生理生化特性和染色体数目等方面来考虑，同时对今后果树三倍体育种的研究方向进行了展望。
关键词：果树三倍体育种
多培体现象是高等生物最普遍的特点之一。据统计，在果树中，多培体类型分属于20科、35属，400余种。果树多倍体一般具有生长旺盛、果实大且少籽或无籽、产量高、适应性和抗逆性强等特点，且能够利用无性繁殖的方式固定其优良性状，使之保持稳定而不分离，在生产上长期利用。三倍体生物与其他多倍体相比，其营养生长通常是最好的。一般说来，三倍体具有两大基本特征：由体细胞增大所引起的巨大性和由减数分裂过程紊乱造成的不育性，再加上多种不同生物类型和品种的三倍体所具有的特殊可贵性状，常引起育种工作者的关注，已经成为果树育种工作的重要组成部分，形成了对三倍体选育多样化的特色。鉴于此，对果树三倍体的特性、目前果树三倍体育种的主要途径、鉴定方法以及三倍体育种中应注意的问题进行分析和总结，以期为三倍体育种的进一步研究提供基础资料。
1果树三倍体的特性
1.1生物学性状
三倍体果树由于染色体组成多于二倍体，在形态上一般表现为巨大性，细胞体积增大，枝条变粗，叶片变宽变厚、叶色浓绿，叶绿体数目增加，气孔变大但密度下降，花粉粒增大，果大、少籽或无籽，可食率高,如三倍体无籽香蕉，三倍体葡萄红标无核、夏黑,三倍体黄盖梨、大叶雪梨等。但是部分器官的巨型并不导致整个植株的巨型化，有的三倍体果树表现为生长缓慢，树体较小，节间变短,如柑桔三倍体前期生长弱，叶片厚而圆。另外,大多数的三倍体对外界环境条件具有较强的适应性，有抗旱、抗病、抗寒等特性。
1.2育性的变化
多倍体植株的能育性一般较原植物降低,一方面是由于染色体在减数分裂中的配对容易发生紊乱，另一方面是由于花粉粒巨型化导致受孕率低、结实率低。而大多数三倍体花粉是完全不育，因此三倍体果树栽培品种大多需要配植一定比例的二倍体授粉树，当然一些具有无融合生殖的果树例外。
2果树三倍体的.选育途径
2.1从自然突变中选育三倍体
目前市场上常见的三倍体果树品种中，有许多是从自然突变选育出来的。虽然自然突变发生的频率很低，但这些突变形成的天然多倍体，成为直接发掘并利用其进行育种的丰富的自然源泉。
2.1.1从果树的实生苗中选育三倍体。果树在生长过程中，由于温度骤变等自然胁迫而引起体细胞或生殖细胞发生突变，可自然产生多倍体，生殖细胞突变的结果是产生了2n配子，从而产生了三倍体、四倍体或更高倍性的种子。目前已从柑橘、枇杷等种子选育出了三倍体植株。
2.1.2从果树芽变中选育三倍体。芽变是体细胞突变的一种。突变发生在芽的分生组织细胞中，当芽萌发长成枝条，并在性状上与品种类型不同而被人们发现时，即为芽变。芽变又分为基因突变和染色体变异，其中有少数三倍体枝条的产生，如山楂品种大金星、伏里红、西丰伏和赞皇大枣等均系芽变三倍体。
2.1.3从扇形嵌合体果实中分离三倍体。果树的果实和种子均由L-II层衍生而来，因此有假说认为：当果实外观出现多倍体特征时，变异所在的扇区相对应的种子也应该出现同类型的倍性变异。Bowman等发现在甜橙、葡萄柚、桔柚和橘橙中出现扇形嵌合体的频率为0.009%~0.271%，并通过培养扇形突变(表现巨型)对应区的种子或退化胚珠获得一些四倍体。从扇形嵌合体果实中分离多倍体的方法简单易行，是获得多倍体的有效途径。但扇形果实的突变频率很低，并且要大量从田间观察收集，易受环境和实验条件的制约。虽然目前还没有通过培养扇形突变发现三倍体突变,但此法不失为三倍体选育的一条途径。
2.2通过有性杂交培育三倍体
利用有性杂交进行三倍体选育，最常用的方法是二倍体与四倍体间的杂交，目前三倍体育种大都采用这种方法；也有利用未减数2n配子进行三倍体育种，但2n配子的自然发生频率较低，因此利用2n配子进行三倍体育种存在一定困难。近年来有不少关于提高2n花粉比率的研究报道。
2.2.1利用二倍体与四倍体杂交选育三倍体。二倍体与四倍体的杂交目前仍是获得三倍体的最有效途径，市场上的三倍体葡萄、苹果、柑橘等，如京早晶、红标无核葡萄，路奥、北斗、新金冠苹果等均系杂交产生。研究表明用四倍体作母本，二倍体作父本时，容易得到发育完全的种子，其中约有30%是三倍体；相反，用二倍体作母本，则正常的单倍性雌配子受精产生的三倍体胚几乎全部退化，有时不能产生种子或极少产生种子。因此在通过有性杂交培育三倍体时，要注意父、母本的选择。对于发育不完全的三倍体合子胚，可以结合胚培养技术进行抢救。另外在柑橘二倍体与二倍体杂交中也发现有三倍体产生。
2.2.２利用未减数配子进行三倍体育种。2n配子在自然界广泛存在，植物2n配子在育种方面具有许多优越性：通过2n配子提高后代倍性，可避免体细胞加倍等无性多倍化使杂交种育性和生活力降低的缺陷；克服远缘杂交不亲和性和胚乳平衡数障碍；2n配子在传递杂合性和上位性方面有特殊价值；利用2n配子在二倍体水平上杂交可获得三倍体或四倍体。三倍体在许多果树上可获得无核品种，同时还能通过无性繁殖长期保存和利用。迄今为止，许多果树上均发现有2n配子存在，但利用2n配子进行多倍体育种的研究报道较少，这主要是因为2n配子的自然发生频率一般都比较低的缘故。据有关研究报道，苹果的2n花粉发生频率为0.014%~1.71%，葡萄的2n花粉发生频率为0.015%~5.85%。提高2n配子的发生频率是利用2n配子进行多倍体育种的关键，另外，由于2n雄配子在育种中的利用较雌配子更为简便，因此，近年来有许多关于提高2n花粉比率的报道。2.3体-配融合培育同源或异源三倍体
自1972年Carlson建立第一个体细胞杂交种植株以来,原生质体育种迅速发展起来，在短短四十多年的时间里,就建立起了一套完整的体细胞杂交体系。原生质体融合技术最为诱人之处就是可以用来产生体细胞杂交种和体-配杂交种，它能克服有性杂交不亲和，性器官败育和珠心胚干扰等常规育种途径所不能解决的问题，扩大了远缘杂交的范围，开辟了育种的新途径。体-配融合是原生质体融合的一种，利用原生质体融合技术将体细胞的原生质体2x和配子的原生质体1x进行融合，产生一个三倍体细胞，进而形成三倍体植株。目前通过原生质体融合已经成功的培育出一些果树的体细胞杂交种植株，体-配融合尚处于研究阶段。
2.4胚乳培养
被子植物胚乳是双受精产物之一，胚乳由3个单倍体核融合而成的，其中1个来自雄配子体，2个来自雌配子体，因此胚乳是天然的三倍体组织，具有双亲的遗传成分，对育种后代性状有一定的预见性。而且胚乳同样具有一般细胞的全能性，通过胚乳细胞的培养可获得三倍体植株。胚乳离体培养比2x与4x杂交获得三倍体快得多。目前已经获得了枇杷、杨桃、葡萄、柿子、西番莲、猕猴桃、柑橘、枣等的胚乳植株。这些胚乳植株有的未能成功移栽大田，有的通过微芽嫁接移栽土壤中生长。但从开始果树胚乳培养至今，应用于生产的却很少。据分析，其中的原因有二：其一，移栽成活困难，与二倍体砧木不亲和；其二，胚乳培养植株的染色体数目不稳定，常含有二倍体及非整倍体，有的在自然移栽生长过程中退化成二倍体。
3三倍体植株的鉴定
植物多倍体的判别和鉴定方法从原理上是依据其外在和内在的特征特性衍生而来的。一般而言，可以以形态外形观察为基础，组织化学、叶绿体计数为辅助、细胞学观察染色体数来确定，切忌以个别特征为依据妄言断之。目前最常见的鉴定方法有：形态鉴定法，细胞学鉴定法，染色体计数法；此外还有利用原位杂交技术如FISH、GISH以及RAPD、RFU技术等进行植株倍性鉴定。对于三倍体来说最直接有效的鉴定方法为染色体记数法，通过检测分生旺盛的器官、组织的染色体数来进行鉴定，它是最直接、也是最准确的鉴定方法。它不但能区别倍性而且还能鉴定是整倍性或非整倍性的变异。因染色体制片技术早已成熟，故切实可行。
4三倍体育种中存在的问题及展望
三倍体果树品种的选育，在一定程度上丰富了果树种质资源，拓宽了果树品种选育的途径，取得了丰硕的成果，但是果树三倍体育种也存在一些各式各样的问题，综合目前果树三倍体育种的研究现状，笔者认为果树三倍体育种中应注意以下几个问题：
4.1重视三倍体新种质的保存
在三倍体的育种过程中存在着移栽困难、砧木不亲和以及三倍体丛生芽不生根等问题。对这些种质，管理不当就会造成种质资源的丢失，可利用组织培养结合低温保存的手段，来保存这些材料的茎尖、茎段、愈伤以及原生质体等，以便将来进一步的研究。
4.2重视三倍体新种质其他特性的发掘
目前三倍体育种的目标主要选育是大果、无籽、风味好的品种，而忽略了对其他特性的挖掘。我们可以在对其进行目标性状鉴定的过程中，同时进行其他特性的检测，如矮化、抗旱、抗病、抗寒等，以便作为新的种质资源加以利用。
4.3对现有的三倍体材料作进一步的研究
目前果树的三倍体研究取得了一些进展，也培育了一些三倍体果树品种，并成功推向市场，但对三倍体的无籽机理尚未完全搞清楚。在今后的研究中可以结合基因工程等高新技术，从分子水平来研究无籽的内在机理。另外，在多倍体包括三倍体的种植过程中，有时会出现倍性的退化问题，即多倍体材料种植一段时间后又退化成了二倍体，这些机理目前尚不清楚，需要进一步深入研究。
4.4加快三倍体果树品种的选育进程
从培育出一个三倍体植株到最终完成对该植株的检测，往往要耗费几年甚至十多年的时间，浪费了许多宝贵的时间。如何缩短育种年限是今后果树三倍体育种应该注意的问题。
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