微生物的实验室培养教案

微生物的实验室培养教案

课题1 微生物的实验室培养

【课标解读】

1、知道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作

2、进行微生物的培养

【教学重难点】无菌技术的操作

【教学过程】

（一）引入新课

2007年，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准正式实施。新标准中的饮用水水质指标由原标准的35项增至106项，增加了71项。其中，微生物指标由2项增至6项，其中大肠杆菌要求每公升水中不得超过3个。你用什么办法将他们找到并准确计数？

在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。

（二）进行新课

一、基础知识

1、培养基（阅读教材）

1.1概念（略）

1.2培养基的种类

(1)形态——固体和液体培养基（琼脂）

(2)成分——天然和合成培养基

(3)作用——选择和鉴别培养基

思考：1、固体培养基和液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什么？

2、如何区分S型细菌和R型细菌？

3、什么是菌落？

【补充】培养基的类型及其应用：（创新设计）

思考：1、硝化细菌、蓝藻与酵母菌的C源和N源有不同吗？能源呢？

2、结合细胞元素组成说明大多数培养基的组成为何有4类？一定都需要吗？

1.4培养条件——营养物质（特殊营养物质—生长因子）、PH、氧气

思考：1、微生物的营养物质就是4类吗? 牛肉膏和蛋白胨能为微生物提供哪些营养？

2、特殊营养物质是什么？试举一例。(介绍生长因子)

3、你能将土壤中酵母菌、硝化细菌、乳酸菌、固氮菌分离出来吗？说一说最佳方案。

4、分离菌种是否一定要选择培养基？

培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ，培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ，培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。

2、无菌技术（阅读并思考回答下列问题）

2.1意义、对象

2.2消毒与灭菌的区别

2.3消毒与灭菌的方法、适用对象

思考：1、什么是巴氏消毒法？灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌特别注意什么？

2、以下各项分别适用哪项无菌技术？简单说明理由

试管口；培养基；接种操作间；葡萄酒；培养皿；接种针（环）；口罩；手；空气；饮用水

3、无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？

二．实验操作（录像）

1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

程序：

计算—称量—溶化—调pH—灭菌—倒平板

思考：1、为何将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯溶化？

2、制备过程中要调节适宜的PH值，要在哪一个环节操作？为什么？

3、请阅读倒平板操作（P17）并回答讨论1—4

4、试管培养基常制成斜面的作用是什么？

2、接种（4种方法）

2．1平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：

2.1.1目的

2.1.2平板划线操作（略）

思考：请回答P18讨论1—3

2．2 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。

2.2.1目的

2.2.2系列稀释操作：

①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹吸3次，使之混匀。

③从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。

思考：为什么操作中试管口和移液管应在离火焰1～2cm处？整个操作过程中使用了几支移液管？

2．2.3涂布平板操作

思考：1、涂布器操作要点及原因

2、教材P19讨论

3、结果分析评价

3．1培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。

3．2 如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请你分析原因？

3．3 培养12h和24h后的菌落大小、位置相同吗？；原因是什么？。

4、课题延伸

频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。

（四）课堂总结、点评

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